Metody pro identifikaci prokaryot
Základní identifikační techniky
- Mikroskopické pozorování: Počáteční vyšetření tvaru, velikosti a uspořádání.
- Barvení: Rozlišení složek buněčné stěny (např.
Metody identifikace bakterií Při identifikaci je primární metodou mikroskopické zkoumání Přímá metoda Tvar, Gramova reakce a pohyblivost Využití znalosti přirozeného prostředí mikroorganismu Kultivační metody Určení fyziologických charakteristik.
Gramovo barvení).
- Kultivace: Pěstování prokaryot na selektivních nebo diferenciálních médiích.
- Biochemické testy: Hodnocení metabolických aktivit a produkce enzymů.
- Molekulární metody: Analýza sekvencí DNA nebo RNA pro definitivní identifikaci.
Podrobné kroky identifikace
- Počáteční pozorování: Pomocí mikroskopie určete základní morfologii (koky, bacily, spirily) a buněčné uspořádání (shluky, řetězce).
-
Postupy barvení:
Naneste diferenciální barviva, jako je Gramovo barvivo.
- Grampozitivní bakterie zadržují barvivo krystalová violeť (vypadají fialově).
- Gramnegativní bakterie jsou kontrastně obarveny safraninem (vypadají růžově).
The aim of “characterization” (in the present context) is to obtain a complete collection of data describing the properties of a prokaryote pure culture—i.e., to form a “description”.
The aim of “identification” is to equate.
-
Kultivace a izolace:
Naočkujte vhodné růstové médium.
- Přímé metody pro identifikaci bakterií na základě sekvencí DNA • Více než ortologních genů vhodných pro identifikaci a fylogenetické studie • Rozdílná úroveň konzervovanosti sekvencí • Nejpoužívanější lokusy: – 16S rRNA – Hsp60 (Cpn60, GroEL) – RpoB – DnaJ/DnaK Sekvence genu pro 16S-ribozomální RNA.
- Používejte selektivní média k inhibici nežádoucích organismů.
- Použijte různá média k rozlišení mezi druhy na základě vzhledu kolonie nebo růstových charakteristik.
To this point we have talked about the two broad domains of prokaryotes: Archaea and Bacteria. Before continuing our study of these organisms, it is important to address a basic question: how does one define a prokaryotic species?
This may seem like a basic question, but it’s a complex and even controversial one if you’re a microbiologist. For eukaryotes, most scientists define a species.
Při identifikaci bakterií se využívají klasifikační charakteristiky, identifikačníschématavšak nejsou totožnás klasifikačními schématy, ale mohou si být podobná.
Identifikační schéma pro skupinu mikroorganismů lze konstruovat až po tom, kdy byla tato skupina klasifikována.
-
Biochemické profilování:
Proveďte sérii testů k detekci specifických enzymových aktivit a metabolických cest (např. oxidázový test, katalázový test, cukerná fermentace).
nepřítomnost jádra – chybí jaderná membrána, pouze nukleoid tvořen jediným kruhovým chromozomem (dvouvláknitá do kruhu uzavřená molekula DNA).
- Molekulární analýza: Použijte techniky, jako je polymerázová řetězová reakce (PCR) následovaná sekvenováním genů ribozomální RNA (např. 16S rRNA) pro přesnou identifikaci, zejména u nekultivovatelných organismů.
Porovnání metod identifikace
| Metoda | Primární účel | Typický časový rámec | Požadované zdroje |
|---|---|---|---|
| Mikroskopie a barvení | Počáteční klasifikace, morfologie, Gramova reakce | Minuty až hodiny | Mikroskop, skvrny, diapozitivy |
| Kultivační a biochemické testy | Izolace životaschopných organismů, podrobné metabolické profilování | 1–7 dní (nebo déle pro pomalé pěstitele) | Inkubátor, růstová média, činidla |
| Molekulární metody (např.
sekvenování 16S rRNA) |
Definitivní identifikace, identifikace nekultivovatelných druhů | 1–3 dny (po extrakci DNA) | Souprava pro extrakci DNA, PCR činidla, sekvenátor, bioinformatické nástroje |
Copyright ©bratusk.pages.dev 2026